Структура фактора IX

Американские ученые успешно провели испытания нового геннотерапевтического препарата для лечения гемофилии В. Результаты работы представлены на 21-м конгрессе Европейской гематологической ассоциации в Копенгагене.

Экспериментальный препарат SPK-FIX разработан компанией Spark Therapeutics. В качестве вектора использовали аденоассоциированный вирус (ААВ) модифицированный для селективного связывания с клетками печени. Этот вектор служит для доставки и встраивания в них гена фактора свертывания IX варианта Padua, примерно в восемь раз более активного, чем обычный фактор IX, дефицит которого приводит к развитию гемофилии В.

SPK-FIX ввели внутривенно трем пациентам (23,18 и 47 лет) в дозе 5×10¹¹ векторных геномов на килограмм массы тела. У первых двух добровольцев активность фактора IX в крови установилась на уровне 28 и 30 процентов через 18 и семь недель соответственно (для поддержания нормального свертывания крови обычно достаточно 10 процентов). У третьего через три недели она достигла 16 процентов. На второй день после терапии этот участник однократно ввел себе рекомбинантный фактор IX, заподозрив кровоизлияние в голеностопный сустав. Больше пациентам заместительная терапия не понадобилась, кровотечений за 28 суммарных человеко-недель не наблюдалось.

Переносимость терапии была хорошей, серьезных побочных эффектов не наблюдалось. Кратковременное повышение уровня печеночных ферментов в крови не превышало норму более чем в 1,5 раза, иммунный ответ на препарат был минимален или отсутствовал, назначения глюкокортикоидных гормонов не понадобилось.

На сегодняшний день это стало самым успешным испытанием генной терапии гемофилии В — другие препараты были менее эффективны и производили серьезные побочные эффекты. По данным MIT Technology Review, в настоящее время проходят клинические исследования еще нескольких геннотерапевтических лекарств: UniQure и Baxalta тестируют лечение гемофилии В, а BioMarin — более распространенной гемофилии А, связанной с дефицитом фактора VIII. Ранее генную терапию гемофилии успешно испытывали на собаках.

Для клинического применения SPK-FIX необходимы дополнительные, более масштабные исследования. Если препарат будет одобрен к применению, лечение будет крайне дорогим — его стоимость для одного пациента может достичь миллиона долларов. Однако генная терапия обеспечивает стойкое излечение, а в настоящее время примерно одному из пяти тысяч мужчин (женщины гемофилией практически не болеют) требуются регулярные инъекции заместительных факторов свертывания, рынок которых составляет порядка 10 миллиардов долларов в год. SPK-FIX мог бы избавить от этой потребности около 40 процентов из них (у остальных в крови присутствуют антитела к ААВ).

Гемофилии — группа наследственных заболеваний, связанных с дефицитом факторов свертывания крови. При них нарушается образование тромбов, что приводит к кровотечениям и кровоизлияниям различной степени тяжести.

14.06.2016 Источник: Олег Лищук nplus1.ru

Мозг в норме и при болезни Альцгеймера

Американским ученым удалось обратить снижение интеллекта у 10 пациентов с ранними стадиями болезни Альцгеймера или предшествующими им состояниями. Результаты работы опубликованы в журнале Aging.

Сотрудники Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе и Института Бака провели экспериментальную терапию 10 пациентов. Все они страдали начинающейся болезнью Альцгеймера, умеренными когнитивными нарушениями или субъективными когнитивными нарушениями (последние два состояния считаются доклинической, или продромальной стадией приобретенной деменции). Диагнозы всех добровольцев подтвердили нейропсихологическим тестированием. Кроме того, у них определили генетические маркеры предрасположенности к заболеванию и характерные повреждения мозга по данным количественной МРТ и позитронно-эмиссионной томографии.

Программное персонализированое лечение проводили по протоколу MEND (метаболическая оптимизация при нейродегенерации), который разработал ранее один из авторов работы Дейл Бридизен (Dale Bredesen). Он подразумевает тщательную диагностику всех известных метаболических нарушений, которые лежат в основе заболевания и появляются на его фоне, после чего пациенту персонально подбирают их коррекцию. Как пишут исследователи, лечение основано на современных данных о коннектоме (совокупности всех нейрональных связей), результатах экспериментов с трансгенными животными и эпидемиологических исследованиях эффектов различных видов монотерапии.

Протокол MEND состоит из 36 пунктов, которые включают глубокую коррекцию диеты, стимуляцию мозга, физические упражнения, нормализацию сна, специфичные фармпрепараты, витамины, фитотерапию и различные дополнительные воздействия, необходимые конкретному пациенту. В процессе лечения назначения корректируют в соответствии с динамикой физиологических показателей больного, что позволяет добиться продолжительного улучшения состояния.

После длительного курса терапии (до 22 месяцев к моменту написания статьи) у всех участников эксперимента наступило выраженное улучшение мыслительных функций, которое отмечали они сами, родственники, коллеги и сиделки. Его подтвердили результаты нейропсихологического тестирования. По словам ученых, степень улучшений значительно превосходила результаты всех известных методов лечения. У одного из пациентов увеличился объем гиппокампа, который до лечения был снижен в результате заболевания.

Большинство пациентов снова смогли заниматься повседневными делами, узнавать людей и предметы. Несколько человек вернулись к работе, у одного восстановились навыки игры на гитаре. По результатам обследования два пациента перестали соответствовать диагностическим критериям болезни Альцгеймера и связанных с ней состояний, то есть их состояние вернулось в пределы нормы.

В настоящее время Управление по продуктам и лекарством США (FDA) не рекомендует скрининговое обследование здоровых людей на вариант эпсилон-4 аполипопротеина Е (ApoE ε4) — маркера предрасположенности к болезни Альцгеймера. Основанием для этого послужило отсутствие данных об обратимости вызванных заболеванием нарушений. Авторы работы пишут, что теперь такие данные получены, и, возможно, рекомендации придется пересмотреть.

По словам Бридизена, его книга с подробным описанием принципов и подходов к коррекции обменных нарушений при нейродегенерации готова к печати и выйдет в свет в 2017 году.

17.06.2016 Источник: Олег Лищук nplus1.ru

Ученые вырастили из человеческих стволовых клеток гипофизарную ткань, способную секретировать гормоны. Пересаженная мышам с недостатком функциональности их собственного гипофиза, она восстановила у них нормальный гормональный обмен. Результаты работы публикует журнал Stem Cell Reports.

Гипофиз — ключевой орган эндокринной системы. Он выделяет гормоны, которые управляют другими железами, регулируют процессы роста, размножения и метаболизма. Недостаточность функции гипофиза проявляется многочисленными и тяжелыми нарушениями. Лечение таких состояний недешево и часто остается лишь паллиативным. С другой стороны, эффективное решение обещают технологии регенеративной медицины — выращивание взрослой специализированной ткани из плюрипотентных стволовых клеток.

Ранее исследователи, экспериментируя со стволовыми клетками мышей и людей, уже получали отдельные типы секретирующих клеток гипофиза. Ученые Мемориального онкологического центра имени Слоуна-Кеттеринга в США продемонстрировали новую методику, позволяющую вырастить полноценную ткань передней доли гипофиза с ее разнообразными типами клеток, выделяющих гормон роста, пролактин, тиреотропин, аднерокортикотропный и другие.

В отличие от предшественников, Лоренс Стьюдер (Lorenz Studer) с коллегами не пытались выращивать и дифференцировать клетки в рамках трехмерной структуры, имитирующей условия их роста в нормальном органе. Вместо этого ученые получили из стволовых клеток эпидермальные плакоды.

Плакоды — простые зародышевые структуры, из которых формируются некоторые нейроны, а также хрусталики глаза. Они невелики и удобны для манипуляций. Обработка их белковыми сигнальными молекулами позволила направить развитие плакод в клетки-предшественницы гипофизарных, а затем и во взрослые дифференцированные клетки. Регулируя относительное содержание всего двух сигнальных белков — фактора роста фибробластов FGF8 и костного морфогенетического белка BMP2 — авторы получали клетки разного типа, выделяющие разные гормоны.

Экспериментируя с такими искусственно выращенными тканями в искусственных условиях, ученые показали, что те не только производят нужные гормоны, но и регулируют секрецию в зависимости от тех же внешних сигналов, на которые реагирует гипофиз в живом мозге. Затем образцы были пересажены линии мышей, страдавших от врожденной недостаточности функций гипофиза, и изучены в живом организме. Здесь они также продемонстрировали совершенно нормальную активность, выделяя пролактин и другие гормоны.

В будущем исследователи планируют усовершенствовать методику с тем, чтобы научиться выращивать ткани гипофиза с заранее заданным составом клеток, который будет оптимален для того или иного больного. После необходимых клинических испытаний такой подход может стать средством терапии до сих пор неизлечимых нарушений функции гипофиза.

15.06.2016 Источник: nplus1.ru

Здоровый Т-лимфоцит человека

На следующей неделе эксперты Департамента здравоохранения США рассмотрят первую заявку на модификацию генома человека с помощью системы CRISPR/Cas9. В случае одобрения ученые смогут приступить к отработке и испытанию новых методов редактирования ДНК Т-лимфоцитов для борьбы с некоторыми формами рака. Об этом сообщает блог Национальных институтов здоровья (National Institutes of Health, NIH). 21 и 22 июня состоится очередное заседание Консультативного комитета по рекомбинантной ДНК (Recombinant DNA Advisory Committee, RAC). Эта экспертная комиссия готовит рекомендации по разработке и испытаниям клинических методов, связанных с модификацией или синтезом ДНК. Выводы RAC представляются руководству NIH, базовой ассоциации центров американского Департамента здравоохранения. Официальные протоколы, правила и требования по безопасности при работе с рекомбинантной ДНК суммируются в NIH Guidelines, которыми руководствуются исследователи и медики. Последнее обновление NIH Guidelines вышло весной 2016 года. Главными изменениями стали упрощенные требования к протоколам по работе с ДНК человека: в частности, на рассмотрение RAC они должны представляться только в некоторых, особо оговоренных случаях. Несколько таких заявок комитет рассмотрит и на ближайшем заседании. Эдвард Штадтмайер (Edward Stadtmauer) из Пенсильванского университета представит экспертам протокол, созданный совместно с крупным исследователем рака Карлом Джуном (Carl June). Еще несколько лет назад его команда сумела модифицировать Т-лимфоциты, внеся в их геном ДНК рецепторов, который позволяют атаковать клетки злокачественных опухолей и ВИЧ. С помощью нового метода CRISPR/Cas9 предлагается внести изменения в ДНК Т-клеток с тем, чтобы они могли действовать против клеток миеломы, меланомы и саркомы. Выделенные из организма больного, модифицированные и снова инъецированные в его кровь, такие лимфоциты позволят иммунной системе активно бороться с опухолью. Однако прежде чем такое лечение станет возможным, необходимо провести дополнительные исследования и всесторонние испытания – после того, как эту работу одобрит RAC.

17.06.2016 Источник: Роман Фишман nplus1.ru